Blog

Jul 16, 2023

L'expression de l'interleukine

BMC Gastroentérologie

BMC Gastroenterology volume 23, Numéro d’article: 163 (2023) Citer cet article

310 Accès

3 Altmetric

Détails des métriques

Le traitement anti-hépatite B (VHB) utilise le fumarate de ténofovir disoproxil (TDF) avec l’interféron alpha pégylé (Peg-IFN-α), qui est plus efficace que le TDF/Peg-IFN-α en monothérapie. Nous avons précédemment montré que l’interleukine-1bêta (IL-1β) est liée à l’efficacité du traitement par IFN-α chez les patients atteints d’hépatite B chronique (CHB). L’objectif était d’étudier l’expression de l’IL-1β chez les patients atteints de CHB traités par Peg-IFN-α association avec TDF et TDF/Peg-IFN-α en monothérapie.

Les cellules Huh7 infectées par le VHB ont été stimulées par Peg-IFN-α et/ou Tenofovir (TFV) pendant 24h. Une étude de cohorte monocentrique sur le recrutement prospectif de patients atteints de CHB : CHB non traitée (Groupe A), TDF combiné avec Peg-IFN-α thérapie (Groupe B), Peg-IFN-α monothérapie (Groupe C), TDF en monothérapie (Groupe D). Les donneurs normaux servaient de témoins. Les données cliniques et le sang des patients ont été recueillis à 0, 12 et 24 semaines. Selon les critères d’intervention précoce, les groupes B et C ont été divisés en deux sous-groupes : le groupe d’intervention précoce (GRE) et le groupe d’intervention non précoce (NERG). Stimulation des cellules hépatomes infectées par le VHB avec IL-1β pour valider l’activité antivirale de l’IL-1β. Pour tester l’échantillon de sang, le surnageant de culture cellulaire et les lysats cellulaires et pour évaluer l’expression des niveaux de réplication de l’IL-1β et du VHB dans divers protocoles de traitement, le test immuno-enzymatique (ELISA) et la réaction en chaîne par polymérase quantitative à transcription inverse (qRT-PCR) ont été utilisés. Les logiciels SPSS 26.0 et GraphPad Prism 8.0.2 ont été utilisés pour l’analyse statistique. Les valeurs P < 0,05 ont été considérées comme statistiquement significatives.

Dans des expériences in vitro, le groupe de traitement Peg-IFN-α plus TFV a exprimé une IL-1β plus élevée et inhibé le VHB plus efficacement que la monothérapie. Enfin, 162 cas ont été recrutés pour observation (groupe A (n = 45), groupe B (n = 46), groupe C (n = 39) et groupe D (n = 32)), et les donneurs normaux (n = 20) ont été recrutés pour le contrôle. Les taux de réponse virologique précoce des groupes B, C et D étaient de 58,7%, 51,3% et 31,2%. À 24 semaines, l’IL-1β dans le groupe B (P = 0,007) et C (P = 0,034) a montré plus élevé qu’à 0 semaine. Dans le groupe B, l’IL-1β a montré une tendance à la hausse à 12w et 24w dans l’ERG. L’IL-1β a significativement réduit les niveaux de réplication du VHB dans les cellules d’hépatome.

L’expression accrue de l’IL-1β peut améliorer l’efficacité du TDF combiné au traitement par Peg-IFN-α dans l’obtention d’une réponse précoce pour les patients atteints d’hépatite C chronique.

Rapports d’examen par les pairs

L’hépatite B chronique (CHB) reste un problème de santé publique important dans le monde, avec environ 250 millions de personnes actuellement infectées dans le monde [1, 2]. En tant que tel, l’éradication du virus de l’hépatite B (VHB) est un défi considérable [3]. À l’heure actuelle, les analogues de l’IFN-α et des nucléos(t)ides (NA) sont utilisés comme médicaments de traitement de l’hépatite B [4,5,6]. Il a été démontré que les AN réduisent les protéines associées au VHB et l’ADN du VHB dans le sérum des patients atteints de CHB [7, 8]. Selon des recherches antérieures, l’utilisation du traitement au fumarate de ténofovir disoproxil (TDF) a significativement amélioré l’activité cytotoxique des lymphocytes T CD8+ spécifiques du VHB [9]. Pendant ce temps, l’interféron alpha pégylé (Peg-IFN-α) a significativement amélioré la clairance sérique de HBsAg par rapport aux NA en monothérapie [10, 11]. Comme on le sait, l’IFN-α peut induire les hépatocytes à exercer des effets antiviraux non cytolytiques en régulant l’expression des gènes et la traduction des protéines [12,13,14,15]. L’IFN-α active également les macrophages, les cellules tueuses naturelles et les cellules T, avec la capacité de libérer des cytokines, telles que IL-6, IL-1β et IL-4, présentant ainsi des effets antiviraux à différents stades de la réplication du VHB [16]. Cependant, l’efficacité du Peg-IFN-α et du TDF est limitée lorsqu’ils sont utilisés seuls [3]. Le TDF et le Peg-IFN-α ont de multiples modes d’action, et l’application combinée est une stratégie potentielle qui peut exercer des effets complémentaires et synergiques. Un essai contrôlé randomisé a révélé que pour l’hépatite B à AgHBe négatif, le traitement par TDF plus Peg-IFN-α pendant 48 semaines est sûr et a de meilleurs effets que le TDF en monothérapie [17].

Selon une autre étude, contrairement à un groupe de non-réponse, le groupe de réponse à l’interféron présentait des niveaux plus élevés d’expression d’ARNm IL-1β dans les tissus hépatiques prétraités par IFN-α [18]. Par la suite, on a découvert que l’IL-1β était plus élevée dans le sang périphérique des patients atteints de CHB dans le groupe de réponse IFN par rapport au groupe de non-réponse [19]. Notamment, il a été démontré que la cytokine pro-inflammatoire pluripotente IL-1β inhibe la réplication du VHB. Isorce [20] et al. ont stimulé les hépatocytes avec une variété de cytokines et ont constaté que l’IL-1β réduisait l’ADN du VHB et montrait une activité anti-VHB plus élevée que les autres. De plus, une étude a indiqué que les patients atteints d’hépatite C chronique présentaient des taux sériques d’IL-1β plus élevés que les patients non infectés par le VHB [21]. Par conséquent, on pourrait supposer que l’IL-1β joue un rôle important dans le processus antiviral du TDF combiné avec Peg-IFN-α.

Dans la présente étude, les différences dans l’expression de l’IL-1β entre les CHB sains et non traités ont été analysées. Dans le même temps, grâce à des études de cohorte, le niveau d’expression et la tendance de changement de l’IL-1β et le taux de réponse virologique précoce chez les patients atteints de CHB traités par Peg-IFN-α combinés avec TDF et traités par Peg-IFN-α / TDF seul ont été observés. Le niveau d’expression de l’IL-1β dans différents schémas thérapeutiques et l’activité anti-VHB de l’IL-1β ont également été évalués par des expériences in vitro. La présente étude offre une base importante pour une compréhension approfondie de la pathogenèse du TDF combiné avec Peg-IFN-α dans le traitement de l’HCB et l’exploration de nouveaux traitements pour le CHB.

Les cellules Huh7 ont été données par le groupe de recherche Wei Xue et cultivées avec le milieu d’aigle modifié (DMEM) de Dulbecco (GIBCO) complété par 1% de pénicilline / streptomycine et 10% de sérum bovin fœtal (FBS) (Excell) à 37 ° C dans un incubateur à 5% de CO2. Les cellules Huh7 transfectées par HBV 1.3-mer WT ont été stimulées avec 20μmol/L Tenofovir (TFV) (Meilunbio, Chine, Cat# MB1386-1, TFV est le composant principal de l’antiviral TDF) + 1000U/mL Peg-IFN-α-2b (Tebao, Chine), 1000U/mL Peg-IFN-α-2b, 20μmol/L TFV, ou 0, 100, 200ng/mL IL-1β (BBI, Chine) pendant 24h. Le PBS a été utilisé comme témoin. Les cellules HepG2.2.15 ont été stockées dans notre groupe de recherche et cultivées par DMEM complétées avec 1% de pénicilline / streptomycine, 10% FBS et 400ug / mL G418 (Meilunbio, Chine). Les cellules HepG2.2.15 ont été stimulées avec IL-1β pendant 48h en l’absence de G418.

Le plasmide WT HBV 1.3-mer a été synthétisé via JISSKANG (Shandong, Chine), et le plasmide vide correspondant a été utilisé comme témoin négatif. La transfection a été réalisée à l’aide de Lipofectamine3000 (Invitrogen, États-Unis) conformément aux instructions du fabricant.

La présente étude était une étude de cohorte observationnelle visant à déterminer les taux de réponse virologique précoce et les tendances dynamiques de l’IL-1β dans différents schémas thérapeutiques pour le traitement de l’hépatite C chronique. Les critères diagnostiques de l’hépatite C tels que définis par les lignes directrices 2019 pour la prévention et le traitement de l’hépatite C par la Société chinoise d’hépatologie, est une maladie inflammatoire chronique du foie causée par une infection persistante par le VHB. L’optimisation en temps opportun des plans de traitement individuels est essentielle pour obtenir une guérison clinique de l’hépatite C et réduire l’incidence de la cirrhose du foie et du cancer du foie. Le recrutement prospectif a été effectué par des patients CHB âgés de 18 à 60 ans qui ont fréquenté la clinique externe du département des maladies infectieuses du premier hôpital affilié de l’Université médicale de Chongqing entre juin 2021 et septembre 2022. Au total, 171 cas ont été recrutés pour observation et 9 cas ont été exclus. Enfin, un total de 162 cas ont été inclus dans l’étude et répartis en quatre groupes : Groupe A (n = 45) - CHB non traité; Groupe B (n = 46) - CHB traité avec une combinaison de TDF et de Peg-IFN-α; Groupe C (n = 39) - CHB traité par Peg-IFN-α seul; Groupe D (n = 32) - CHB traité avec TDF seul. De plus, 20 donneurs sains ont été recrutés pour le groupe témoin. L’étude a été menée conformément à la Déclaration d’Helsinki, et tous les patients ont donné leur consentement éclairé et l’ont signé avant de participer à l’étude.

(1) Critères d’inclusion

L’étude comprenait des patients âgés de 18 à 60 ans qui répondaient aux critères diagnostiques de l’hépatite B tels que définis par les directives de prévention et de traitement de l’hépatite B en Chine de 2019 en Chine, avec des HBsAg et HBeAg sériques positifs, ou des HBeAg négatifs. Les patients ont également obtenu un résultat positif ou négatif au test de dépistage de l’ADN du VHB et ont donné leur consentement à l’utilisation de Peg-IFN-α et de TDF.

(2) Critères d’exclusion

Les patients ont été exclus de l’étude s’ils avaient d’autres infections virales telles que le VIH, le VHE, le VHC et d’autres co-infections, des manifestations terminales de cirrhose du foie, d’insuffisance hépatique, de cancer du foie et d’autres maladies, des maladies chroniques graves telles que cardiovasculaires, urinaires, le tissu conjonctif et le système sanguin, s’ils ont subi des événements indésirables graves pendant l’utilisation de Peg-IFN-α ou s’ils n’ont pas donné leur consentement éclairé.

(3) Critères de réponse rapide

Une réponse précoce a été définie comme une réduction de l’ADN du VHB > 2 log10 UI/mL ou une diminution rapide de l’AgHBs au cours de la période de traitement de 24 semaines (HBsAg < 200 UI/mL ou une diminution > 1 log10 UI/mL à 12 ou 24 semaines).

(4) Critères de réponse non précoce

La non-réponse a été définie comme des patients dont l’ADN du VHB avait diminué de moins de 2 log10 UI/mL à 24 semaines ou dont l’AgHBs avait diminué de moins de 1 log10 UI/mL à 12 ou 24 semaines.

Les patients du groupe A n’avaient reçu aucun traitement anti-VHB. Les patients du groupe B ont reçu 180 ug / semaine de Peg-IFN-α-2b et 300 mg / jour de TDF. Les membres du groupe C ont reçu 180 μg/semaine de Peg-IFN-α-2b. Les patients du groupe D ont reçu 300 mg / jour de TDF. Les donneurs en bonne santé servaient de contrôle.

Les patients ont été observés aux semaines 0, 12 et 24 (le suivi a été arrêté lorsque les patients ont présenté une conversion sérologique de l’AgHBs). Des échantillons de sang et les informations suivantes ont été recueillis: (1) Chaque patient a fourni un échantillon de 4 ml de sang périphérique à l’aide d’un tube anticoagulant contenant de l’EDTA. L’échantillon a ensuite été centrifugé à 3000 tr/min pendant 20 min à 4 °C, et le plasma a été collecté. Les cellules mononucléées du sang périphérique (PBMC) ont été isolées et l’ARN a été extrait. Les échantillons de plasma et d’ARN ont été conservés à -80 °C; (2) les renseignements cliniques de base et les antécédents épidémiologiques, tels que les antécédents familiaux d’hépatite B, les antécédents de médicaments et les antécédents d’allergie; (3) Tests sanguins, y compris le sang de routine (WBC et PLT) et la fonction hépatique (ALT, AST, TBIL); (4) Indices virologiques: ADN sérique du VHB, HBsAg, HBeAg (l’ADN du VHB était exprimé et calculé comme 0 UI / mL lorsque < 20 UI / mL, HBsAg était exprimé et calculé comme 25 000 UI / mL lorsque ≥ 25 000 UI / mL; Les HBsAg ont été exprimés et calculés comme 0 UI/mL lorsqu'< 0,05 UI/mL) ; (5) concentration d’IL-1β et niveau d’expression relative de l’ARNm IL-1β: la concentration plasmatique d’IL-1β a été détectée à l’aide du kit ELISA, tandis que l’ARNm IL-1β a été mesuré par qRT-PCR dans les PBMC; (6) Données d’imagerie: échographie Doppler couleur de la partie supérieure de l’abdomen / tomodensitométrie / IRM améliorée et élastographie transitoire hépatique.

L’ARN cellulaire total a été extrait à l’aide de Trizol plus (Takara, Bio). La transcription inverse a été réalisée à l’aide du kit de réactif primeScriptTMRT (Takara, Cat# RR047A). Des réactions quantitatives de PCR en temps réel ont été réalisées sur un système (Biorad) à l’aide du kit SYBR® Premix Ex Taq™ (Takara, Cat# RR820A). L’expression du gène a été normalisée par rapport à la β-actine et calculée à l’aide de la méthode 2−ΔΔCt. Les amorces étaient les suivantes : β-actine, avant 5'-CAT GTA CGT TGC TAT CCA GGC-3', reverse 5'-CTC CTT AAT GTC ACG CAC GAT-3'; IL-1β, avant 5'-ATG ATG GCT TAT TAC AGT GGC AA-3', inversé 5'-CTC CTT AAT GTC ACG CAC GAT-3'; Pg ARN, avant 5'-GCC TTA GAG TCT CCT GAG CA -3', REVERSE 5'- GAG GGA GTTC TTC TTC TAG G -3'; ARN du VHB, avant 5'-ACC GAC CTT GAG GCA TAC TT-3', inverse 5'- GCC TAC AGC CTC CTA GTA CA -3'.

HBsAg et HBeAg dans le surnageant ont été mesurés à l’aide de kits ELISA (Kehua Biotech, Chine). Les niveaux d’expression protéique de l’IL-1β ont également été mesurés à l’aide de kits ELISA (J&L Biological, Chine).

Ficoll-Paque Plus (Cytiva, Cat#17,144,003) a été ajouté aux échantillons de sang des patients, et les PBMC ont été isolés au moyen de la centrifugation par gradient de densité.

La normalité de toutes les variables a été testée par le test de Shapiro-Wilk et l’histogramme. Les variables quantitatives ont été exprimées sous forme de moyenne ± écart-type, de médianes (IQR) ou de numérations (%). Les logiciels SPSS 26.0 et GraphPad Prism 8.0.2 ont été utilisés pour l’analyse statistique et la représentation graphique des données. Si les deux ensembles de données suivaient une distribution normale, le test t était utilisé; sinon, le test U de Mann-Whitney a été utilisé. Lors de la comparaison de plusieurs ensembles de données, l’analyse de l’ANOVA ou des mesures répétées a été utilisée si les données suivaient une distribution normale; sinon, le test Friedman M a été utilisé. Le test de Kruskal-Wallis a été utilisé pour trois échantillons indépendants avec une utilisation de distribution anormale. La comparaison des taux a été testée avec les tests de Pearson χ2 et χ2. Une valeur P < 0,05 a été considérée comme statistiquement significative, comme l’indiquent les éléments suivants : *P < 0,05, **P < 0,01, ***P < 0,001, ****P < 0,0001.

Pour étudier l’expression de l’IL-1β dans le VET en association avec Peg-IFN-α et TFV/Peg-IFN-α en monothérapie, les cellules Huh7 ont été transfectées avec le VBB 1,3-mer WT et cultivées pendant 24h en l’absence (PBS) ou en présence de TFV 20μmol/L, Peg-IFN-α 1000U/mL [19], et 20μmol/L TFV + 1000U/mL Peg-IFN-α. Les niveaux d’expression de l’ARNm IL-1β, de l’ARN HBV et de l’ARN Pg dans les cellules ont été détectés au moyen de la qRT-PCR. ELISA a été utilisé pour détecter l’IL-1β, l’HBsAg et l’AgHBeAg dans les surnageants de culture cellulaire. Comme le montre la Fig. 1 (b, c, e, f), la monothérapie TFV + Peg-IFN-α et Peg-IFN-α a significativement réduit l’ARN du VHB, l’ARN Pg, l’AgHBsAg et l’AgHBe par rapport à la monothérapie par le VET (P < 0,0001). Les niveaux d’expression de l’ARNm IL-1β et de la protéine dans les groupes TFV+ Peg-IFN-α et Peg-IFN-α en monothérapie étaient plus élevés que ceux du groupe TFV en monothérapie. Notamment, le groupe TFV + Peg-IFN-α a exprimé des niveaux plus élevés d’ARNm IL-1β et de protéines que le groupe Peg-IFN-α monothérapie (Fig. 1 (a, d)). En résumé, l’effet thérapeutique du TFV + Peg-IFN-α était meilleur que celui des groupes Peg-IFN-α ou TFV en monothérapie et pourrait améliorer la capacité antivirale en régulant l’expression de l’IL-1β.

TFV + Peg-IFN-α favorisé l’expression de l’IL-1β et inhibé la réplication du VHB : les cellules Huh7 ont été transfectées avec HBV 1.3-mer WT et traitées avec 20μmol/L TFV, 1000 U/mL Peg-IFN-α, et 20 μmol/L TFV + 1000 U/mL Peg-IFN-α pendant 24h

(a-c) Les cellules ont été récoltées et soumises à la qRT-PCR. (d-f) Les niveaux de surnageant IL-1β, HBsAg et HBeAg ont été détectés par ELISA. Les résultats sont présentés comme les moyennes ± écart-type, *P < 0,05, **P < 0,01, ***P < 0,001, ****P < 0,0001

Dans la présente étude, 171 patients atteints de CHB ont été recrutés et 9 cas ont été exclus en raison de l’absence d’échantillons de sang. Enfin, 162 CHB ont été recrutés, dont 45 cas dans le groupe A, 46 cas dans le groupe B, 39 cas dans le groupe C, 32 cas dans le groupe D et 20 cas dans le groupe témoin. Les patients des groupes B, C et D ont été suivis pendant 24 semaines, sauf conversion sérologique HBsAg. La procédure de suivi est illustrée à la Fig. 2.

Patients atteints de CHB inscrits au processus de suivi

Auparavant, une réévaluation des données antérieures de Genome Oligo Microarray recueillies par les auteurs actuels a révélé des niveaux d’ARNm significativement plus élevés chez les répondeurs IL-1β dans les tissus hépatiques prétraités α IFN que chez les non-répondeurs [19]. Pour évaluer davantage l’expression de l’IL-1β chez les patients atteints de CHB, des échantillons de sang ont été prélevés sur des individus en bonne santé et des patients CHB non traités, et les taux d’IL-1β dans le plasma ont été mesurés à l’aide d’ELISA, tandis que l’ARNm IL-1β dans les PBMC a été évalué par qRT-PCR. Par rapport au groupe témoin, les niveaux d’ARNm et de protéines d’IL-1β dans le groupe A étaient significativement plus élevés (Fig. 3 (a-b)) (P < 0,05). Il n’y avait pas de différences significatives dans l’âge, le sexe ou les antécédents familiaux d’hépatite B, ALT, AST, TBil, WBC et PLT entre le groupe A et le groupe témoin (P > 0,05), comme le montre le tableau 1.

Expression de l’IL-1β et taux de réponse précoce dans différents groupes. (a) L’ARNm IL-1β dans le groupe A et le groupe témoin a été mesuré au moyen de la qRT-PCR dans les PBMC. (b) IL-1β dans le groupe A et le groupe témoin a été mesuré à l’aide d’ELISA dans le plasma. c) Taux de réponse virologique précoce pour les groupes B, C et D

À 0 semaine, il n’y avait pas de différences significatives dans l’âge, le sexe, les antécédents familiaux d’hépatite B, AST, ALT, TBIL, WBC et PLT chez les patients des groupes B, C et D(P > 0,05), comme le montrent les tableaux 2 et 3. À 12 et 24 semaines, comparativement au groupe D, l’ALAT et l’ASAT dans les groupes B et C ont augmenté de façon significative, et les globules blancs et la PLT ont diminué de manière significative (P < 0,05). Dans les groupes B et C, l’ALT et l’AST à 12 et 24 semaines étaient significativement plus élevées que celles à 0 semaine, et les WBC et PLT étaient significativement inférieures à celles à 0 semaine (P < 0,05). Dans le groupe D, il n’y avait pas de différences significatives dans l’ALT, AST, DBIL, WBC et PLT à 0, 12 et 24 semaines.

Après 24 semaines de suivi, 4 patients du groupe B ont obtenu HBsAg SC, avec un taux médian (quartile) d’AgHBsAg de 1001,3 (10,9, 2852,7) UI/ml à 24 semaines, ce qui était significativement inférieur au niveau initial de 1718,4 (675,3, 5945,1) UI/ml (P < 0,05). Dans le groupe C, 7 patients ont obtenu HBsAg SC, avec un taux médian (quartile) d’AgHBsAg de 48,7 (0,98, 989,4) UI / ml à 24 semaines, ce qui était significativement inférieur au niveau de base de 208,1 (46,8, 3451,6) UI / ml, mais il n’y avait pas de différence significative par rapport au niveau à 12 semaines (P > 0,05). Aucun des patients du groupe D n’a obtenu d’AgHBs SC, et il n’y avait pas de différence significative dans les taux d’AgHBs entre 0, 12 et 24 semaines (Tableau 3). De plus, le taux d’atteinte de l’ADN-VHB (-) chez les patients du groupe B était significativement plus élevé à 12 et 24 semaines qu’à 0 semaine (P < 0,05). De même, la proportion de patients du groupe C ayant atteint l’ADN-VHB (-) était significativement plus élevée à 12 et 24 semaines qu’à 0 semaine (P<0,05). Il n’y avait pas de différence significative dans la proportion de patients ayant atteint l’ADN du VHB (-) dans le groupe D à 0, 12 et 24 semaines (P > 0,05). Les taux de réponse virologique précoce des groupes B, C et D étaient de 58,7% (27/46), 51,3% (20/39) et 31,2% (10/32), respectivement, il n’y avait pas de différence significative (Fig. 3c). Cependant, le taux de réponse virologique précoce (EVRR) était plus élevé dans le groupe B (TDF combiné avec Peg-IFN-α) par rapport aux groupes TDF/Peg-IFN-α en monothérapie (groupes C et D).

L’expression de l’IL-1β du groupe B dans le plasma des patients atteints de CHB à 24 semaines était significativement plus élevée qu’à 0 semaine (P = 0,007). De même, les taux plasmatiques d’IL-1β dans le groupe C à 24 semaines étaient significativement plus élevés qu’à 0 semaine (P = 0,034). Cependant, l’IL-1β dans le groupe D ne différait pas significativement à 0, 12 et 24 semaines (P > 0,05). Il n’y avait aucune différence statistiquement significative dans les niveaux d’IL-1β entre les groupes B, C et D à 0, 12 et 24 semaines (Fig. 4).

Expression de l’IL-1β dans les groupes B, C et D. Les plasmas ont été prélevés dans le CHB (dont 46 patients dans le groupe B, 39 patients dans le groupe C et 32 patients dans le groupe D). ELISA a été utilisé pour mesurer les niveaux d’IL-1β dans le plasma. Les résultats sont présentés sous forme de médiane (IQR). * P < 0,05, **P < 0,01

Les groupes B et C ont été divisés en GRE et NERG selon les critères d’intervention précoce. Dans le groupe B, l’expression d’IL-1β dans le NERG était plus élevée que dans l’ERG à 0w et 12w, respectivement (Fig. 5a); l’expression de l’IL-1β dans l’ERG a montré une tendance à la hausse pendant le traitement, et l’expression de l’IL-1β à 24w était significativement plus élevée que celle à 0w (P < 0,05) ; l’expression de l’IL-1β dans le NERG a été significativement augmentée à 12w et 24w par rapport à 0w (P < 0,05), mais l’expression de l’IL-1β à 24w a montré une tendance à la baisse par rapport à 12w. Dans le groupe C, il n’y avait pas de différence significative entre le groupe de réponse d’expression IL-1β et le NERG à 0, 12 et 24 semaines (P > 0,05), respectivement; l’expression de l’IL-1β dans l’ERG et le NERG a montré une tendance à la hausse avec les progrès du traitement, mais la différence n’était pas statistiquement significative. (Fig. 5)

L’expression de l’IL-1β dans ERG et NERG des groupes B et C (a-c). L’expression de l’IL-1β dans l’ERG et le NERG du groupe B ; (d-f) L’expression de l’IL-1β dans les GRE et les NERG du groupe C;*P < 0,05, **P < 0,01, ***P < 0,001, ****P < 0,0001

Pour étudier l’activité antivirale potentielle de l’IL-1β, les cellules Huh7 ont été transfectées avec HBV 1.3mer WT et traitées avec IL-1β (0-200 ng / ml) pendant 24h. Le traitement par IL-1β a entraîné une réduction des niveaux d’ARN du VHB, d’ARN Pg, d’AgHBsAg et d’AgHBeAg dans les cellules Huh7 transfectées par le VHB (Fig. 6a-d). De plus, l’IL-1β a diminué le niveau de réplication du VHB dans les cellules HepG2.2.15 avec une expression stable du VHB (Fig. 6e-h). Les résultats confirment l’activité anti-VHB de l’IL-1β dans les hépatocytes grâce à des expériences in vitro.

Activité anti-VHB de l’IL-1β dans les cellules de l’hépatome. (a-d) Les cellules Huh7 ont été transfectées avec des plasmides WT HBV 1,3-mer et cultivées pendant 24h en l’absence (PBS) ou en présence d’IL-1β (100 et 200 ng / ml); (e-h) Les cellules HepG2.2.15 ont été stimulées avec 0 et 200ng/ml d’IL-1β pendant 48h ; Les cellules ont été récoltées et soumises à la RT-qPCR. Les HBsAg et HBeAg du surnageant ont été analysés à l’aide de l’ELISA. *P < 0,05, **P < 0,01, ***P < 0,001, ****P < 0,0001

L’hépatite C peut être contrôlée, mais l’élimination du VHB demeure un défi. Actuellement, une cure fonctionnelle est le résultat optimal. Les IFN-α et les NA sont des médicaments de première intention pour l’hépatite C chronique. Le TDF réduit l’incidence du cancer du foie avec une faible résistance [22, 23], et on a également découvert qu’il affectait la fonction immunologique. La difficulté de traiter les infections par le VHB est principalement causée par l’ADNccc [11]. Jusqu’à présent, l’IFN-α a été la seule option de traitement pour cibler l’ADNc persistant dans les noyaux hépatocytes des patients atteints d’infections chroniques par le VHB par immunomodulation [24]. Ainsi, en modifiant la réponse immunitaire humaine, la combinaison de TDF et de Peg-IFN-α peut être plus bénéfique que la monothérapie pour augmenter la clairance du VHB par l’hôte et rétablir la fonction de réponse immunitaire antivirale de l’organisme. Dans des recherches antérieures menées par les auteurs actuels, l’IL-1β s’est avérée potentiellement associée à l’efficacité antivirale. Dans la présente étude, des expériences in vitro ont d’abord été menées. Comme le montre la Fig. 1, des expériences in vitro ont été menées pour stimuler les cellules Huh7 infectées par le VHB en utilisant le TFV, le Peg-IFN-α et le TFV en combinaison avec le Peg-IFN-α. Les résultats ont révélé que les niveaux d’expression de l’IL-1β étaient plus élevés dans le groupe de traitement TFV + Peg-IFN-α par rapport à ceux du groupe de monothérapie Peg-IFN-α / TFV. Dans le même temps, les traitements avec TFV + Peg-IFN-α et Peg-IFN-α en monothérapie, administrés par infection Huh7 du modèle HBV, se sont révélés supprimer considérablement les niveaux d’ARN du VHB et d’ARN Pg. En conclusion, on pourrait supposer que TDF + Peg-IFN-α favorise une expression accrue de l’IL-1β chez les patients atteints d’HCB, peut-être liée à l’inhibition plus efficace de la réplication du VHB.

Dans la présente étude, 45 patients non traités atteints d’hépatite C et 20 personnes en bonne santé ont été recrutés, l’expression de l’IL-1β chez les patients atteints d’hépatite C s’est avérée significativement plus élevée que chez les personnes en bonne santé. Le but de la présente étude était d’évaluer l’expression de l’IL-1β chez les patients atteints de CHB ayant reçu du TDF avec Peg-IFN-α ou en monothérapie. Au total, 117 patients atteints de CHB ont été classés dans le groupe B (TDF + Peg-IFN-α), le groupe C (Peg-IFN-α) et le groupe D (TDF). Les résultats ont révélé que les groupes B et C présentaient des anomalies dans les globules blancs, la PLT, l’ASAT et l’ALT après le début du traitement, peut-être en raison de l’expression immunomodulatrice et pro-inflammatoire des cytokines. La monothérapie Peg-IFN-α et le TDF avec Peg-IFN-α se sont avérés plus efficaces pour réduire les taux d’HBsAg et d’ADN-VHB par rapport à la monothérapie TDF. L’EVRR était plus élevé dans le groupe B que dans les groupes C et D. Selon les données décrites, le TDF combiné au Peg-IFN-α avait une meilleure efficacité anti-VHB que le Peg-IFN-α/TDF en monothérapie. Par la suite, les changements dans l’expression de l’IL-1β au cours de la période de suivi ont été évalués. Les résultats indiquent que les taux d’IL-1β dans les groupes B et C à 24 semaines étaient significativement plus élevés qu’au départ. Notamment, l’augmentation de l’expression de l’IL-1β était plus prononcée dans le groupe de thérapie combinée que dans le groupe de monothérapie Peg-IFN-α. De plus, il n’y avait pas de différence significative dans les niveaux d’IL-1β dans le groupe C à 0, 12 et 24 semaines, respectivement. Le TDF associé au traitement par Peg-IFN-α pourrait favoriser une expression accrue de l’IL-1β dans l’ERG et le NERG, mais l’expression de l’IL-1β dans le NERG a diminué après 12 semaines, ce qui peut également être la raison de la non-réponse précoce chez les patients atteints d’HCB. Aucune augmentation significative de l’IL-1β n’a été observée dans le groupe traité par Peg-IFN-α en monothérapie. Ainsi, l’efficacité plus élevée du TDF associé au Peg-IFN-α par rapport à la monothérapie peut être liée à la promotion de l’expression de l’IL-1β chez les patients. Sans aucun doute, l’IFN-α peut favoriser une augmentation de l’IL-1β [16]. Comme indiqué précédemment, le VHB peut inhiber l’activation des corps inflammatoires et la production d’IL-1β en inhibant l’activation de p-STAT1 et p-P65. Comme le VHB est inhibé, l’expression de l’IL-1β augmente [19]. Par conséquent, le traitement combiné du TDF et du Peg-IFN-α peut mieux inhiber la réplication du VHB, tandis que l’effet inhibiteur du VHB sur les voies inflammatoires est affaibli, ce qui est bénéfique pour la sécrétion d’IL-1β. L’IL-1β aide le TDF et le Peg-IFNα à supprimer le VHB. En outre, les résultats des expériences in vitro indiquent une puissante activité anti-VHB de l’IL-1β. Une étude a révélé que l’IL-1β est un facteur important dans le contrôle des agents pathogènes agressifs tels que les virus de l’hépatite B et C en activant l’expression du gène immunitaire spécifique [25, 26] et en favorisant le recrutement des lymphocytes au site primaire de l’infection [27, 28]. En tant que tel, la prochaine étape consistera à étudier la voie anti-VHB IL-1β.

L’expression de l’IL-1β dans le groupe B était comparativement plus faible que dans le groupe de non-réponse précoce à 0w, peut-être en raison de la charge virale élevée, de l’expression élevée des protéines liées au VHB et de la présence d’AgHBsAg > 3000UI / mL, HBeAg (+) et HBV-ADN (+) chez les patients atteints d’hépatite B chronique (CHB), ce qui peut entraîner une expression élevée de l’IL-1β à l’inclusion. Le traitement séquentiel du TDF et du Peg-IFN-α peut avoir un meilleur effet sur l’élimination complète du VHB chez ces patients.

Une meilleure compréhension des mécanismes du Peg-IFN-α dans le traitement de l’hépatite B chronique en combinaison avec le TDF peut faciliter la découverte de nouvelles stratégies de traitement pour guérir l’hépatite Bco. Selon les données actuelles, la thérapie combinée de Peg-IFN-α et TDF a montré un taux de réponse virologique plus élevé et une expression accrue de l’IL-1β que la monothérapie Peg-IFN-α/TDF. Le TDF combiné à Peg IFN-α dans le traitement de l’hépatite B chronique peut améliorer l’efficacité antivirale en augmentant l’expression de l’IL-1β. La méthode décrite a le potentiel de servir de nouvelle approche thérapeutique pour les patients atteints d’ECH, en particulier pour les patients qui ne répondent pas. La méthode permet d’évaluer l’efficacité du traitement à un stade précoce et permet d’ajuster en temps opportun les plans de traitement individuels, réduisant potentiellement le risque de complications. Les résultats actuels soutiennent le rôle crucial du TDF + Peg-IFN-α dans le contrôle et l’élimination du VHB et mettent en lumière la façon dont le virus de l’hépatite B interagit avec le système immunitaire inné. Malgré les avantages significatifs, la présente étude doit être validée dans le contexte d’une plus grande population potentielle de patients et d’un suivi prolongé.

Les ensembles de données générés et / ou analysés au cours de la présente étude ne sont pas accessibles au public pour protéger la vie privée des patients, mais sont disponibles auprès de l’auteur correspondant sur demande raisonnable.

Analogues nucléos(t)ide

Interféron-pégée-a

Virus de l’hépatite B

Hépatite B chronique

Interleukine-1beta

Fumarate de ténofovir disoproxil

Alanine transaminase

Aspartate transaminase

Bilirubine totale

Globules blancs

Plaquettes

Antigène de surface de l’hépatite B

Acide désoxyribonucléique du virus de l’hépatite B

Observatoire Polaris C. Prévalence mondiale, traitement et prévention de l’infection par le virus de l’hépatite B en 2016: une étude de modélisation. Lancet Gastroenterol Hepatol. 2018;3(6):383–403. https://doi.org/10.1016/S2468-1253(18)30056-6.

Article Google Scholar

Martinez MG, Boyd A, Combe E, Testoni B, Zoulim F. ADN circulaire fermé par covalence: la cible thérapeutique ultime pour guérir les infections par le VHB. J Hepatol. 2021;75(3):706–17. https://doi.org/10.1016/j.jhep.2021.05.013.

Article CAS PubMed Google Scholar

Seto WK, Lo YR, Pawlotsky JM, Yuen MF. Infection chronique par le virus de l’hépatite B. Lancette. 2018;392(10161):2313–24. https://doi.org/10.1016/S0140-6736(18)31865-8.

Article PubMed Google Scholar

Hou J, Wang G, Wang F, Cheng J, Ren H, Zhuang H, Sun J, Li L, Li J, Meng Q, et al. Lignes directrices sur la prévention et le traitement de l’hépatite B chronique (mise à jour de 2015). J Clin Transl Hepatol. 2017;5(4):297–318. https://doi.org/10.14218/JCTH.2016.00019.

Article PubMed PubMed Central Google Scholar

Association européenne pour l’étude du foie. Adresse électronique eee, Association européenne pour l’étude du L: EASL 2017 clinical practice guidelines on the management of hepatitis B virus infection. J Hepatol. 2017;67(2):370–98. https://doi.org/10.1016/j.jhep.2017.03.021.

Article Google Scholar

Terrault NA, Lok ASF, McMahon BJ, Chang KM, Hwang JP, Jonas MM, Brown RS Jr, Bzowej NH, Wong JB. Mise à jour sur la prévention, le diagnostic et le traitement de l’hépatite B chronique: AASLD 2018 hepatitis B guidance. Hépatologie. 2018;67(4):1560–99. https://doi.org/10.1002/hep.29800.

Article PubMed Google Scholar

Zhang Y, Hu P, Qi X, Ren H, Mao RC, Zhang JM. Une comparaison de la telbivudine et de l’entécavir dans le traitement des patients positifs à l’antigène de l’hépatite B e: une étude de cohorte prospective en Chine. Clin Microbiol Infect. 2016;22(3):287e281–289. https://doi.org/10.1016/j.cmi.2015.10.024.

Article CAS Google Scholar

Hou J, Yin YK, Xu D, Tan D, Niu J, Zhou X, Wang Y, Zhu L, He Y, Ren H, et al. Telbivudine versus lamivudine chez les patients chinois atteints d’hépatite B chronique : résultats à 1 an d’un essai randomisé en double aveugle. Hépatologie. 2008;47(2):447–54. https://doi.org/10.1002/hep.22075.

Article CAS PubMed Google Scholar

Duan SP, Zhu LH, Hou LJ, Wang HW, Zhu XW, Hao J. [Effet de la thérapie antivirale au fumarate de ténofovir disoproxil sur la fonction des cellules T CD8 + spécifiques du virus chez les patients atteints d’hépatite B chronique]. Zhonghua Gan Zang Bing Za Zhi. 2021;29(5):421–6. https://doi.org/10.3760/cma.j.cn501113-20191113-00420.

Article CAS PubMed Google Scholar

Ning Q, Han M, Sun Y, Jiang J, Tan D, Hou J, Tang H, Sheng J, Zhao M. Passage de l’entécavir au PegIFN alfa-2a chez les patients atteints d’hépatite B chronique HBeAg-positive: un essai ouvert randomisé (essai OSST). J Hepatol. 2014;61(4):777–84. https://doi.org/10.1016/j.jhep.2014.05.044.

Article CAS PubMed Google Scholar

Revill PA, Chisari FV, Block JM, Dandri M, Gehring AJ, Guo H, Hu J, Kramvis A, Lampertico P, Janssen HLA, et al. Une stratégie scientifique mondiale pour guérir l’hépatite B. Lancet Gastroenterol Hepatol. 2019;4(7):545–58. https://doi.org/10.1016/S2468-1253(19)30119-0.

Article PubMed PubMed Central Google Scholar

Ye J, Chen J. Interféron et hépatite B: perspectives actuelles et futures. Immunol avant. 2021;12:733364. https://doi.org/10.3389/fimmu.2021.733364.

Article CAS PubMed PubMed Central Google Scholar

Bonvin M, Achermann F, Greeve I, Stroka D, Keogh A, Inderbitzin D, Candinas D, Sommer P, Wain-Hobson S, Vartanian JP, et coll. Expression inductible par l’interféron des enzymes d’édition d’APOBEC3 dans les hépatocytes humains et inhibition de la réplication du virus de l’hépatite B. Hépatologie. 2006;43(6):1364–74. https://doi.org/10.1002/hep.21187.

Article CAS PubMed Google Scholar

Wang YX, Niklasch M, Liu T, Wang Y, Shi B, Yuan W, Baumert TF, Yuan Z, Tong S, Nassal M, et al. MX2 inductible par l’interféron est un facteur de restriction de l’hôte de la réplication du virus de l’hépatite B. J Hepatol. 2020;72(5):865–76. https://doi.org/10.1016/j.jhep.2019.12.009.

Article CAS PubMed Google Scholar

Imam H, Kim GW, Mir SA, Khan M, Siddiqui A. Le gène 20 stimulé par l’interféron (ISG20) dégrade sélectivement les transcriptions du virus de l’hépatite B modifié par la N6-méthyladénosine. PLoS Pathog. 2020;16(2):e1008338. https://doi.org/10.1371/journal.ppat.1008338.

Article CAS PubMed PubMed Central Google Scholar

Xia Y, Protzer U. Contrôle du virus de l’hépatite B par les cytokines. Virus. 2017;9(1). https://doi.org/10.3390/v9010018.

Bahardoust M, Mokhtare M, Barati M, Bagheri-Hosseinabadi Z, Karimi Behnagh A, Keyvani H, Agah S. Un essai contrôlé randomisé de l’interféron alpha pégylé avec le fumarate de ténofovir disoproxil pour l’hépatite B chronique négative à l’antigène B B : une étude de suivi de 48 semaines. J Infecter Chemother. 2020;26(12):1265–71. https://doi.org/10.1016/j.jiac.2020.07.005.

Article CAS PubMed Google Scholar

Xiao C, Qin B, Chen L, Liu H, Zhu Y, Lu X. La préactivation de la signalisation de l’interféron dans le foie est corrélée à la non-réponse au traitement par interféron alpha chez les patients chroniquement infectés par le virus de l’hépatite B. J Hepat viral. 2012;19(2):E1-10. https://doi.org/10.1111/j.1365-2893.2011.01471.x.

Article CAS PubMed Google Scholar

Lei Q, Li T, Kong L, Li L, Ding X, Wang X, Zhang X, Qin B. HBV-Pol est crucial pour l’inhibition médiée par le VHB de l’activation de l’inflammasome et la production d’IL-1beta. 2019;39(12):2273–84. https://doi.org/10.1111/liv.14214.

Article CAS PubMed Google Scholar

Isorce N, Testoni B, Locatelli M, Fresquet J, Rivoire M, Luangsay S, Zoulim F, Durantel D. Activité antivirale de divers interférons et cytokines pro-inflammatoires dans les hépatocytes en culture non transformés infectés par le virus de l’hépatite B. 2016;130:36–45. https://doi.org/10.1016/j.antiviral.2016.03.008.

Article CAS PubMed Google Scholar

Tian ZJ, Shen Y, Li XR, Wei YN, Fan H, Ren QK. Augmentation des taux d’interleukine-32, d’interleukine-1 et d’interféron gamma dans le sérum de patients atteints d’hépatite B et dans les cellules mononucléaires du sang périphérique stimulées par le VHB provenant de volontaires sains. J Infecter la santé publique. 2019;12(1):7–12. https://doi.org/10.1016/j.jiph.2018.06.006.

Article PubMed Google Scholar

Choi WM, Choi J, Lim YS. Effets du ténofovir vs de l’entécavir sur le risque de carcinome hépatocellulaire chez les patients atteints d’une infection chronique par le VHB: une revue systématique et une méta-analyse. Clin Gastroenterol Hepatol. 2021;19(2):246–258e249. https://doi.org/10.1016/j.cgh.2020.05.008.

Article CAS PubMed Google Scholar

Liang X, Gao Z, Xie Q, Zhang J, Sheng J, Cheng J, Chen C, Mao Q, Zhao W, Ren H, et al. Efficacité et innocuité à long terme du fumarate de ténofovir disoproxil chez les patients chinois atteints d’hépatite B chronique : résultats à 5 ans. 2019;13(3):260–9. https://doi.org/10.1007/s12072-019-09943-6.

Article PubMed Google Scholar

Tan G, Song H, Xu F, Cheng G. Quand le virus de l’hépatite B rencontre les interférons. Microbiol avant. 2018;9:1611. https://doi.org/10.3389/fmicb.2018.01611.

Article PubMed PubMed Central Google Scholar

Li Y, Que L, Fukano K, Koura M, Kitamura K, Zheng X, Kato T, Aly HH, Watashi K, Tsukuda S, et al. MCPIP1 réduit l’ARN-VHB en ciblant sa structure epsilon. 2020;10(1):20763. https://doi.org/10.1038/s41598-020-77166-z.

Article CAS PubMed PubMed Central Google Scholar

Ibrahim MK, Abdelhafez TH, Takeuchi JS, Wakae K, Sugiyama M, Tsuge M, Ito M, Watashi K, El Kassas M, Kato T, et al. MafF est un facteur hôte antiviral qui supprime la transcription du promoteur du noyau du virus de l’hépatite B. J Virol. 2021;95(15):e0076721. https://doi.org/10.1128/JVI.00767-21.

Article PubMed Google Scholar

Watashi K, Liang G, Iwamoto M, Marusawa H, Uchida N, Daito T, Kitamura K, Muramatsu M, Ohashi H, Kiyohara T, et al. L’interleukine-1 et le facteur de nécrose tumorale alpha déclenchent la restriction de l’infection par le virus de l’hépatite B via une cytidine désaminase induite par l’activation de la cytidine désaminase (AID). 2013;288(44):31715–27. https://doi.org/10.1074/jbc.M113.501122.

Article CAS PubMed PubMed Central Google Scholar

Dinarello CA. Interleukine-1 dans la pathogenèse et le traitement des maladies inflammatoires. Sang. 2011;117(14):3720–32. https://doi.org/10.1182/blood-2010-07-273417.

Article CAS PubMed PubMed Central Google Scholar

Télécharger les références

Nous tenons à remercier Wei Xue pour son aide dans cette étude. Nous remercions Xiamen Tebao Biological Engineering Company d’avoir fourni Peg-IFN-α-2b. Nous tenons à remercier les membres de notre équipe, Haiying Luo, Guili Tan, Yadi Li et Bo Qin, pour leur merveilleuse collaboration et leur soutien patient.

Ce travail a été soutenu par la Fondation des sciences naturelles de Chongqing, Chine (cstc2020jcyj-msxmX0221).

Département des maladies infectieuses, Chongqing Laboratoire clé des maladies infectieuses et parasitaires, le premier hôpital affilié de l’Université médicale de Chongqing, n ° 1 Youyi Road, district de Yuzhong, Chongqing, 400016, Chine

Xiaoxia Hu, Haiying Luo, Guili Tan, Yadi Li & Bo Qin

Vous pouvez également rechercher cet auteur dans PubMed Google Scholar

Vous pouvez également rechercher cet auteur dans PubMed Google Scholar

Vous pouvez également rechercher cet auteur dans PubMed Google Scholar

Vous pouvez également rechercher cet auteur dans PubMed Google Scholar

Vous pouvez également rechercher cet auteur dans PubMed Google Scholar

Xiaoxia Hu a terminé l’expérience cellulaire, recueilli et analysé les données, interprété les données et rédigé le travail; Haiying Luo et Guili Tan, ainsi que Yadi Li ont participé à la collecte de données sur les cas; Bo Qin a conçu le projet, révisé le manuscrit et approuvé la soumission. Tous les auteurs ont lu et approuvé la version finale du manuscrit.

Correspondance avec Bo Qin.

Les auteurs ne déclarent aucun intérêt concurrent.

Tous les patients ont donné leur consentement et signé un formulaire de consentement éclairé pour participer à l’étude. Cette étude a été réalisée conformément aux principes de la Déclaration d’Helsinki et a été approuvée par le Comité d’éthique du premier hôpital affilié de l’Université médicale de Chongqing (2022-8).

Sans objet.

Springer Nature reste neutre en ce qui concerne les revendications juridictionnelles dans les cartes publiées et les affiliations institutionnelles.

Libre accès Cet article est sous licence Creative Commons Attribution 4.0 International, qui permet l’utilisation, le partage, l’adaptation, la distribution et la reproduction sur tout support ou format, à condition que vous donniez le crédit approprié au(x) auteur(s) original(s) et à la source, fournissez un lien vers la licence Creative Commons et indiquez si des modifications ont été apportées. Les images ou autres éléments de tiers contenus dans cet article sont inclus dans la licence Creative Commons de l’article, sauf indication contraire dans une ligne de crédit du matériel. Si le matériel n’est pas inclus dans la licence Creative Commons de l’article et que votre utilisation prévue n’est pas autorisée par la réglementation légale ou dépasse l’utilisation autorisée, vous devrez obtenir la permission directement du détenteur des droits d’auteur. Pour consulter une copie de ce permis, visitez http://creativecommons.org/licenses/by/4.0/. La renonciation à la dédicace Creative Commons Public Domain (http://creativecommons.org/publicdomain/zero/1.0/) s’applique aux données mises à disposition dans cet article, sauf indication contraire dans une ligne de crédit aux données.

Réimpressions et autorisations

Hu, X., Luo, H., Tan, G. et coll. L’expression de l’interleukine-1β chez les patients atteints d’hépatite B chronique traités par interféron-alpha pégylé associé au fumarate de ténofovir disoproxil et à la monothérapie. BMC Gastroenterol 23, 163 (2023). https://doi.org/10.1186/s12876-023-02812-5

Télécharger la citation

Reçu: 09 février 2023

Acceptée: 10 mai 2023

Publication : 19 mai 2023

DEUX : https://doi.org/10.1186/s12876-023-02812-5

Toute personne avec qui vous partagez le lien suivant pourra lire ce contenu :

Désolé, aucun lien partageable n’est actuellement disponible pour cet article.

Fourni par l’initiative de partage de contenu Springer Nature SharedIt